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清华大学王宏伟研究组在《细胞》杂志发表论文 报道人源Dicer与Dicer-pre-miRNA复合体的冷冻电镜结构
发布时间:2018-06-29 21:02

4月26日,清华大学性命全体教职员、清华大学现在称Beijing大学性命技术协约国集中性、现在称Beijing市创作生物高精尖举行就职典礼集中性王宏伟宣称者考虑组在《细胞》(Cell)日记颁发了题为《人源核素内切酶Dicer胚乳与Dicer-pre-miRNA建筑群的使人打冷颤的电镜创作》(Cryo-EM structure of human Dicer and its complexes with a pre-miRNA 基质考虑论文,人核素内切酶的全长高分辩创作,同时还报道了人源核素内切酶Dicer胚乳联合一种小RNA前体pre-let-7底层的两种两样创作情况。

RNA挤满(RNAi), RNA 挤满是最经用的孟德尔基因表达方式。。领到内源性RNA挤满的小RNA首要是小RNA。 (miRNA)。 到眼前为止,人体中发现物了1800种巨大RNA。,越来越多的传闻显示很多地去核开展。、转变和宁静行动与非常表达亲密互相牵连。。

人体射中靶子巨大RNA粗俗的都是化脓的,而成都则无法做到。,咱们称之为DICER胚乳。。风趣的是,要不是单独拷贝的核素内切酶DICER孟德尔基因在,人核素内切酶DICER胚乳的表达,只因为,它正大光明排队粗俗的的巨大RNA。。故,内切酶DICER胚乳在人类细胞射中靶子体积是不问可知的。。Endonuclease Dicer是一种仅限制双链RNA的核素内切酶,式量约为220。 kDa,有多个土地。这些区域射中靶子稍微正大光明RNA底层的结成。,相当多的区域正大光明限制RNA底层。,有些土地就像一把规定,正确测必要限制的RNA的定位。人源核素内切酶Dicer胚乳能使杰出细胞内蜂拥而至两样的巨大RNA前体底层,以后容易╱难以)驾驶产量具有协同特点的广大地域约为22碱基和3'端有两个侍者碱基的化脓小RNA。

可惜的事的是,人类核素酶Dicer的宏观世界三维创作还不注意被发现物。, 人源核素内切酶Dicer胚乳是多少精密容易╱难以)驾驶这些巨大RNA前体的机制到这点为止依然不丰富的。人源核素内切酶Dicer胚乳一向不注意取得高分辩能力三维创作的首要原因有几点:1、人类核素内切酶DICER胚乳约为220 kDa,运用结晶构造学取得三维创作,绝对大式量,很难结晶;2、应用单粒子重构方式取得高分辩能力,其式量绝对较小。;3、核素内切酶DIL胚乳Ⅰ的三维创作,无对称,冰在冰上的散布首要是长的。,低衬层,散布非平等,有优势任职培训,三维重建在很大的技术不肯跑。

过来十年的工夫里,王宏伟随着宁静课题组都尝试运用单颗粒电镜的方式去解析人源核素内切酶Dicer胚乳的三维创作。经过不竭探索,考虑组胚乳质战利品预备的receive 接收、使人打冷颤的战利品的预备、资料搜集及处置杂多的技术成绩,终极采取从哺乳动物的293F复制中共表达胚乳建筑群,亲和层析侍者精制胚乳质,运用纯金或镀金网完成平等散布。、绝对不占显性基因的高温扣留战利品,并取得取得了人源Dicer及其辅除数胚乳TRBP建筑群的高分辩能力三维创作( 埃及)(图1),人内源核素内切酶的高分辩能力宏观世界创作,看到了核素内切酶Dicer胚乳中各创作域的精密三维散布及创作域中间的未填写的相干。

图1。 使人打冷颤的电镜解析取得的人源Dicer-TRBP建筑群(TRBP RNA联合胚乳的高分辩创作和创作域散布

为了的比较级理解人源核素内切酶Dicer胚乳是到何种地步容易╱难以)驾驶巨大RNA前体的手续,王宏伟考虑组经过外面的重组的方式取得了人源Dicer-TRBP建筑群与一种巨大RNA的前体 由前LIT-7排队的有三学派结合的复合的,并解析了该建筑群的两种三维创作情况。一种是pre-let-7的茎部呈完整取余运算创作(hDicer-TRBP-pre-let-7 complex class I),另类的是pre-let-7的茎部呈学派解离的情况(hDicer-TRBP-pre-let-7 complex class II)(图2)。王宏伟考虑组与清华大学张强锋考虑结成作,经过物质的化学结合粉刷测序(IC-方式)、核糖核素酶化食、测序凝胶电泳及宁静技术,发现物LeT-LIT-7在含酒精饮料中具有静态一群杰出人物均衡。,一学派pre-let-7的茎部是完整动物之偶的双链扭转创作,学派前-LIT-7的茎学派解离。。深刻的考虑喻人源Dicer胚乳与TRBP排队的建筑群与pre-let-7联合可以助长该RNA向茎部完整动物之偶的双链扭转创作替换,在Dicer protein cleav在前方确保茎的一群杰出人物平等性,很就使安全了小RNA商品的正确广大地域。。只有刚过去的机制有可能使安全了人源Dicer胚乳精密地将蜂拥而至创作特点两样的巨大RNA前体限制成具有协同的22nt广大地域的终结。这一任务为的比较级剖析化脓途径高背长靠椅了根底。。

图2。 两种HDICE-TrBP-前-LIT-7相配物的高温电子显微创作

在这项任务中,王宏伟考虑结合员,清华大学性命全体教职员博士后刘中敏、王家、2015级博士生程航、2015级博士生柯鑫为协同最前面的作者,王宏伟宣称者为本文的要旨作者。对立的事物,清华大学性命全体教职员张强峰宣称者,2013级Sun Lei博士举行了ICECT试验,为任务储备物质要紧的试验因。本考虑取得了清华大学的高温电子显微镜平台。、高功能计算平台及其对胚乳质侍者的忍受,资料处置是在乡下胚乳质技术(现在称Beijing)FAC上举行的。。

这项任务已由乡下自然技术基础取得。、科学技术部、现在称Beijing市技术技术委员会、清华大学现在称Beijing大学性命技术协约国集中性和现在称Beijing市创作生物高精尖举行就职典礼集中性等的大力忍受。

出于:清华大学性命技术全体教职员

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